快速從藥物活性納米抗體
篩選推進(jìn)至產(chǎn)業(yè)化開發(fā)
畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是一種常見的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，和釀酒酵母同屬酵母表達(dá)系統(tǒng)，其中酵母是單細(xì)胞真核生物，培養(yǎng)條件簡(jiǎn)單，生長(zhǎng)繁殖迅速，可以耐受較高的流體靜壓，特別適合基因工程產(chǎn)品的大規(guī)模生產(chǎn)，可以提高生產(chǎn)效率、降低生產(chǎn)成本。酵母表達(dá)系統(tǒng)兼具原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，在高水平表達(dá)蛋白的同時(shí)，兼具翻譯后修飾功能，且外源蛋白基因遺傳穩(wěn)定，受到越來越多研究組織和醫(yī)藥生產(chǎn)企業(yè)的青睞，現(xiàn)在已有胰島素、乙肝表面抗原、人血清白蛋白、表皮生長(zhǎng)因子、腫瘤壞死因子、抗體藥物等多種蛋白產(chǎn)品采用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)并已實(shí)現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。
畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)具體如下：
含有特有的AOX（醇氧化酶基因）強(qiáng)效啟動(dòng)子，用甲醇即可對(duì)外源基因進(jìn)行表達(dá)調(diào)控；
表達(dá)水平高，產(chǎn)量都在1g/L以上；
既可以在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，又可以順利獲得細(xì)胞分泌表達(dá)到胞外；
對(duì)于帶有指導(dǎo)分泌信號(hào)肽序列的外源目的基因，目的蛋白可以直接分泌到發(fā)酵液，有利于后續(xù)分離純化；
畢赤酵母發(fā)酵使用的培養(yǎng)基成本低廉，碳源為甘油或葡萄糖，其余為甲醇、無機(jī)鹽，培養(yǎng)基中不含蛋白，非常利于下游產(chǎn)品分離純化；
發(fā)酵工藝成熟，易放大。已經(jīng)有大規(guī)模工業(yè)化高密度生產(chǎn)的發(fā)酵工藝，且細(xì)胞干重達(dá)100g/L以上，表達(dá)重組蛋白已成功放大到10000L；
外源蛋白基因遺傳穩(wěn)定，外源基因可整合到畢赤酵母染色體上，隨染色體復(fù)制而復(fù)制，不易丟失；
作為真核表達(dá)系統(tǒng)，畢赤酵母具有真核生物的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能。
當(dāng)前，抗體類蛋白藥物大都是順利獲得CHO細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)發(fā)酵生產(chǎn)，畢赤酵母與CHO細(xì)胞相比，仍然有諸多優(yōu)勢(shì)，第一時(shí)間畢赤酵母與CHO細(xì)胞都是真核細(xì)胞，擁有高等真核表達(dá)系統(tǒng)的諸多優(yōu)點(diǎn)，比如蛋白質(zhì)加工、蛋白質(zhì)折疊以及翻譯后修飾；其次，畢赤酵母構(gòu)建細(xì)胞株更快，不需要耗時(shí)的病毒清除驗(yàn)證步驟，極大節(jié)約了研發(fā)周期；最后，畢赤酵母的發(fā)酵培養(yǎng)比CHO細(xì)胞會(huì)有更快、更容易、更便宜、更高產(chǎn)量的特點(diǎn)，可高密度大規(guī)模培養(yǎng)，大幅度降低抗體的生產(chǎn)成本。
畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)是現(xiàn)在最為成功的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一，屬于酵母表達(dá)系統(tǒng)的一種。酵母是一種單細(xì)胞低等真核生物，培養(yǎng)條件普通，生長(zhǎng)繁殖速度迅速，能夠耐受較高的流體靜壓，用于表達(dá)基因工程產(chǎn)品時(shí)，可以大規(guī)模生產(chǎn)，有效降低了生產(chǎn)成本，作為一種后起的外源蛋白表達(dá)系統(tǒng)，酵母表達(dá)系統(tǒng)由于兼具原核以及真核表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)，正在基因工程領(lǐng)域中得到日益廣泛的應(yīng)用。
J9集团官网生物已成功建立畢赤酵母CMC平臺(tái)，現(xiàn)在已具備多個(gè)完整項(xiàng)目開發(fā)經(jīng)驗(yàn)。畢赤酵母CMC平臺(tái)90%以上的項(xiàng)目產(chǎn)量在1g/L以上，純化平臺(tái)工藝，其整體回收率在50%以上。從細(xì)胞株構(gòu)建到蛋白純化僅需3-4個(gè)月，極大地縮短了項(xiàng)目開發(fā)時(shí)間。
J9集团官网生物建立的小試和中試表達(dá)平臺(tái)，包括12臺(tái)7L發(fā)酵罐和1臺(tái)100L發(fā)酵罐，同時(shí)配套了相應(yīng)的純化系統(tǒng)；此外，500 L畢赤酵母中試GMP潔凈廠房正式投產(chǎn)運(yùn)營(yíng)，使得J9集团官网生物具備臨床I期、II期樣品生產(chǎn)能力。畢赤酵母納米抗體500L GMP中試生產(chǎn)車間的建成填補(bǔ)了該領(lǐng)域的行業(yè)空白，極具稀缺性與競(jìng)爭(zhēng)性。
